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Western blot

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简介

免疫印迹immunoblotting又称蛋白质印迹western blot,它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。Western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于western blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一种常规技术。Western blot常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。 
    仁源生物为您提供标准western blot技术服务(自备一抗或由仁源生物代购)。并对band进行灰度分析,得出蛋白表达相对定量结果。


原理

Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋 白水平的表达。


送样要求

l  需新鲜或正确保存的蛋白样品或者蛋白粗提液

l  阳性对照样品(如果有)

l  检测目的蛋白的一抗(或仁源生物代购)

l  组织样品不少于50mg

l  细胞不少于5×106个

l  总蛋白浓度不低于 2μg/μl(至少50μl)


服务流程

 

l  蛋白提取和定量(如果提供蛋白样品,则直接电泳预实验检测抗体特异性)

l  SDS-PAGE 10-15% 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

l  转膜(PVDF膜)

l  封闭 (5%脱脂奶粉)

l  一抗孵育(其中内参基因为Gapdh或Actin)

l  二抗孵育(如果由于材料降解或一抗造成实验无法继续,则收取相关预实验费用)

l  显色(ECL)

l  曝光、洗片、灰度分析

 

提供结果

l  蛋白浓度

l  胶片

l 

l  灰度分析(如果需要)

l  实验报告

 

结果实例

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